傳代培養(yǎng)操作步驟：

一、貼壁培養(yǎng)

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

（1）傳代前在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和生長密度，當(dāng)細(xì)胞生長密度達(dá)到80%~90%時(shí)，即可進(jìn)行傳代。

（2）吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)液。加入PBS清洗1~2次，左右輕輕搖晃后棄掉。

（3）根據(jù)培養(yǎng)瓶大小向瓶內(nèi)加入適量含EDTA的，一般應(yīng)覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底。

（4）把培養(yǎng)瓶放入37℃ CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，2~5min后拿出放在倒置顯微鏡下進(jìn)行觀察，當(dāng)發(fā)現(xiàn)有70%~80%細(xì)胞收縮變圓、細(xì)胞間隙變大時(shí)，再輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞脫落，然后立即加入2倍量的培養(yǎng)液中止消化，使用吸頭輕輕吹打，混合均勻，以防消化過度。

（5）吸出所有細(xì)胞懸液至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。

（6）棄上清，加入適量培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，輕輕吹打混勻，使細(xì)胞均勻分散。

（7）用吸頭吸取適量細(xì)胞懸液，以適宜的密度接種于新的培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)足培養(yǎng)液，搖勻，放置于37℃ CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

（8）根據(jù)細(xì)胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間，甚至進(jìn)行細(xì)胞凍存。

WERI-RB-1人視網(wǎng)膜神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞

細(xì)胞基本屬性：

細(xì)胞詳細(xì)介紹：

二、懸浮細(xì)胞

傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

一般實(shí)驗(yàn)室中懸浮細(xì)胞傳代方法分為直接傳代法和離心傳代法（培養(yǎng)液中含有細(xì)胞碎片的情況下）。當(dāng)在顯微鏡下觀察到懸浮細(xì)胞已經(jīng)長滿至80%~90%（細(xì)胞懸液變黃）時(shí)，即可進(jìn)行傳代。

（1）嚴(yán)格進(jìn)行無菌操作，所用一切試劑及耗材均應(yīng)無菌，且須在無菌超凈工作臺中紫外照射30min以上，以免細(xì)胞發(fā)生污染。

（2）所用培養(yǎng)液必須適宜細(xì)胞生存和生長。來源于不同動(dòng)物種類、組織類型的細(xì)胞，對培養(yǎng)液的要求不一樣，必要時(shí)可用預(yù)實(shí)驗(yàn)的方法選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)液。

（3）胎牛血清對于維持細(xì)胞生存，促進(jìn)細(xì)胞生長起著關(guān)鍵作用。可根據(jù)文獻(xiàn)或預(yù)實(shí)驗(yàn)選擇合適的胎牛血清。一旦確定，就應(yīng)保持用至實(shí)驗(yàn)完成。

（4）消化細(xì)胞時(shí)應(yīng)避免消化時(shí)間過短導(dǎo)致消化不收集到的細(xì)胞數(shù)量少，或消化時(shí)間過長導(dǎo)致細(xì)胞成團(tuán)塊樣絮狀游離，這時(shí)的細(xì)胞已有損傷或死亡，影響細(xì)胞數(shù)量和實(shí)驗(yàn)進(jìn)度。

（5）細(xì)胞離心的時(shí)候應(yīng)避免離心力過小收集的細(xì)胞數(shù)量不夠，或離心力過大對細(xì)胞產(chǎn)生損傷。離心后的細(xì)胞沉淀?xiàng)壢ド锨搴?，?yīng)先彈散細(xì)胞沉淀，再加入培養(yǎng)液重懸，這樣比直接吹打?qū)?xì)胞損傷小，可以提高細(xì)胞活率。

（6）吹打細(xì)胞時(shí)應(yīng)盡量避免細(xì)胞的產(chǎn)生，以免損傷細(xì)胞，影響細(xì)胞狀態(tài)（吹打過程中殘留部分液體在吸頭內(nèi)可以減少氣泡的產(chǎn)生）。

公司正在出售的產(chǎn)品：

NHDF adult Pellet 正常人皮膚成纖維細(xì)胞團(tuán)塊(捐獻(xiàn)者) > 1 mio.cells CCCSCK 人異常原(APT)ELISA 試劑盒 IgG/PE-Cy3 PE-Cy3標(biāo)記的小鼠抗IgG 0.1ml

phospho-GABRG2(Ser366)： 0酸化γ基γ2受體抗體 小鼠淋巴細(xì)胞白血病;L1210

293E(人胚腎細(xì)胞(EBNA1基因修飾)) 5×106cells/瓶×2 人異(iso-Hyd)ELISA 試劑盒 IgG/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的小鼠抗IgG 0.1ml

GABRG3： G基受體γ3/GABAA Rγ3抗體 Spike Others SARS SARS Spike S1 Subunit 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

人肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞cDNAHPAF cDNA 人乙型腦炎病毒抗體(JE-Ab)ELISA試劑盒 IgG/APC APC標(biāo)記的小鼠抗IgG 0.1ml

NEK7： 絲酸/蘇酸蛋白激酶Nek7抗體 口腔角質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基OKM

F9小鼠畸胎瘤細(xì)胞 F9 mouse teratoma cells DMEM培養(yǎng)基+10%FBS 大鼠嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素A(CyPA)ELISA試劑盒 CD20(Rat Troponin T)  小鼠CD20分子 96T

NPTX1： 神經(jīng)細(xì)胞正五聚體1抗體 VLDLR Others Human 人 VLDLR / VLDL Receptor 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

T-108A膠原酶(含10mL酶解緩沖液)1mL 大鼠嗜鉻蛋白B(CHGB)ELISA試劑盒 PDGF-BB  大鼠血小板衍生生長因子BB 96T

NNT： 酰胺核苷酸轉(zhuǎn)氫酶抗體 大鼠腎小球系膜細(xì)胞;HBZY-1

WERI-RB-1人視網(wǎng)膜神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞B16F10細(xì)胞，小鼠黑色素瘤高轉(zhuǎn)移細(xì)胞 FRhK-4(恒河猴胚腎細(xì)胞) SV40轉(zhuǎn)染人成骨細(xì)胞;hFOB 1.19 人α半乳糖基抗體(Gal)ELISA 試劑盒 SFRP1(Secreted frizzled related protein 1) 分泌型卷曲相關(guān)蛋白1抗原 0.5mg

IKBKE： 核因子κB抑制蛋白E抗體 ICOS Others Human 人 ICOS / AILIM / CD278 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

人胚肺成纖維細(xì)胞;MRC-5 人α半乳糖苷酶(αGAL)ELISA 試劑盒 SGLT1(sodium-glucose cotransporter1) -葡萄糖共轉(zhuǎn)運(yùn)載體1抗原 0.5mg

phospho-ITGB4(Tyr1494)： 0酸化整合素β4抗體 人B淋巴細(xì)胞瘤細(xì)胞;RAMOS

SHG-44 (人膠質(zhì)瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 / 恒河猴 c-MET / HGFR 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 人αN已?；咸擒彰?span>(αNAG)ELISA 試劑盒 Shadow/SPRN(Shadow of prion protein precursor) 新朊蛋白/朊蛋白相關(guān)蛋白/沙杜(Shadoo)蛋白抗原 0.5mg