人骨骼肌細胞永生化

細胞基本屬性：

細胞詳細介紹：

二、懸浮細胞

傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

一般實驗室中懸浮細胞傳代方法分為直接傳代法和離心傳代法（培養(yǎng)液中含有細胞碎片的情況下）。當在顯微鏡下觀察到懸浮細胞已經長滿至80%~90%（細胞懸液變黃）時，即可進行傳代。

（1）嚴格進行無菌操作，所用一切試劑及耗材均應無菌，且須在無菌超凈工作臺中紫外照射30min以上，以免細胞發(fā)生污染。

（2）所用培養(yǎng)液必須適宜細胞生存和生長。來源于不同動物種類、組織類型的細胞，對培養(yǎng)液的要求不一樣，必要時可用預實驗的方法選擇適當?shù)呐囵B(yǎng)液。

（3）胎牛血清對于維持細胞生存，促進細胞生長起著關鍵作用?？筛鶕?jù)文獻或預實驗選擇合適的胎牛血清。一旦確定，就應保持用至實驗完成。

（4）消化細胞時應避免消化時間過短導致消化不收集到的細胞數(shù)量少，或消化時間過長導致細胞成團塊樣絮狀游離，這時的細胞已有損傷或死亡，影響細胞數(shù)量和實驗進度。

（5）細胞離心的時候應避免離心力過小收集的細胞數(shù)量不夠，或離心力過大對細胞產生損傷。離心后的細胞沉淀棄去上清后，應先彈散細胞沉淀，再加入培養(yǎng)液重懸，這樣比直接吹打對細胞損傷小，可以提高細胞活率。

（6）吹打細胞時應盡量避免細胞的產生，以免損傷細胞，影響細胞狀態(tài)（吹打過程中殘留部分液體在吸頭內可以減少氣泡的產生）。

公司正在出售的產品：

血液誘導型巨噬細胞一氧化氮合成酶（iNOS /NOS2/mNOS）活性熒光定量檢測試劑盒

動物軟組織可溶性膜蛋白（純提）制備試劑盒

體液HPV6（HUMAN PAPILLOMAVIRUS-6）病毒定性檢測試劑盒

細胞CASPASE-9蛋白表達比色法定量檢測試劑盒

血液高效液相色譜法定量檢測試劑盒

石蠟切片免疫組織化學AP酶聯(lián)NBT/BCIP基礎檢測試劑盒（無一抗和二抗）

組織EPHB4激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）

端粒酶活性TRAP實時定量檢測試劑盒

人血液轉（TRANSFERRIN）免疫比濁法定量檢測試劑盒

純化微粒體磷脂酶D2（Phospholipase D2）活性熒光定量檢測試劑盒

細胞丙二醛（MDA）含量比色法定量檢測試劑盒

體外非細胞系統(tǒng)細胞色素P450亞酶CYP2C8（DBF）活性

線粒體復合物V蛋白表達西方雜交分析試劑盒

血液血管緊張素Ⅰ轉化酶2（ACE2）活性熒光定量檢測試劑盒

MEM培養(yǎng)基

孕激素誘導阻斷因子抗體

鈣平衡調節(jié)蛋白1抗體

親環(huán)素蛋白ppil4抗體

IQCG蛋白抗體

細胞分化蛋白質RCD1抗體

Wnt蛋白家族7B抗體

跨膜γ羧基酸蛋白4抗體

APC標記人CD24單克隆抗體

人骨骼肌細胞永生化鋅指蛋白70抗體

傳代培養(yǎng)操作步驟：

一、貼壁培養(yǎng)

細胞傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

（1）傳代前在倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)和生長密度，當細胞生長密度達到80%~90%時，即可進行傳代。

（2）吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶內的培養(yǎng)液。加入PBS清洗1~2次，左右輕輕搖晃后棄掉。

（3）根據(jù)培養(yǎng)瓶大小向瓶內加入適量含EDTA的，一般應覆蓋整個培養(yǎng)瓶底。

（4）把培養(yǎng)瓶放入37℃ CO2培養(yǎng)箱進行消化，2~5min后拿出放在倒置顯微鏡下進行觀察，當發(fā)現(xiàn)有70%~80%細胞收縮變圓、細胞間隙變大時，再輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細胞脫落，然后立即加入2倍量的培養(yǎng)液中止消化，使用吸頭輕輕吹打，混合均勻，以防消化過度。

（5）吸出所有細胞懸液至離心管內，1000rpm/min離心3~5min。

（6）棄上清，加入適量培養(yǎng)液重懸細胞，輕輕吹打混勻，使細胞均勻分散。

（7）用吸頭吸取適量細胞懸液，以適宜的密度接種于新的培養(yǎng)瓶中，補足培養(yǎng)液，搖勻，放置于37℃ CO2培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

（8）根據(jù)細胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時間，甚至進行細胞凍存。