NOD樣受體1elisa試劑盒的性能:
準(zhǔn)確性:標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值。
靈敏度:檢測(cè)濃度小于0.1pg/mL。
特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
重復(fù)性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10%、板間變異系數(shù)小于15%。
貯藏:2-8℃,避光防潮保存。
NOD樣受體1elisa試劑盒的操作流程如下:
?。?)待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl,每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔;設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過(guò)夜。
?。?)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,產(chǎn)品僅用于科研用洗滌液過(guò)洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
?。?)陰性對(duì)照孔每孔加入PBS50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
?。?)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
?。?)洗板。
?。?)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液100μl。
?。?)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
?。?)洗板。
?。?0)每孔加TMB顯色液100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
?。?1)每孔加100μl2mol/LH2SO4終止反應(yīng)。
?。?2)分別測(cè)450nm吸光值W1和630nm吸光值W2,測(cè)得的OD值為兩者之差,以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。