注意事項(xiàng):
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。產(chǎn)品僅用于科研操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:牛眼莫拉氏菌PCR檢測(cè)試劑盒在哪里有賣
英文名稱:Moraxella bovoculiPCR
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開(kāi)發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
?
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,產(chǎn)品僅用于科研按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4:PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
產(chǎn)品僅用于科研典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán),通過(guò)多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。其主要步驟是:
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合,兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長(zhǎng)短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開(kāi)始摻入,以目的基因?yàn)槟0鍙?’→3’方向延伸,合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
牛眼莫拉氏菌PCR檢測(cè)試劑盒在哪里有賣原理是由一對(duì)引物介導(dǎo),能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過(guò)n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
2-乙酰吡啶/甲基-2-吡啶基酮/1-(2-吡啶基)乙酮/2-乙?;拎?甲基吡嗪基酮/2-AcetylpyridineAR,98%25克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,1122-62-9RT,避光
2,2'-聯(lián)吡啶/α,α-聯(lián)吡啶/2,2-聯(lián)吡啶/α,α’-聯(lián)氮雜苯/2,2'-DipyridylAR,99.5%1克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,366-18-7RT,避光
4,4'-聯(lián)吡啶/γ,γ-聯(lián)吡啶/4,4-聯(lián)吡啶/4-聯(lián)吡啶/4,4'-BipyridineCP,98%1克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,553-26-4RT,避光
2-羥基吡啶/2-吡啶酚/2-吡啶酮/2-HydroxypyridineAR,98%25克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,142-08-5RT,避光
4-羥基吡啶/4-吡啶酚/4-吡啶酮/4-HydroxypyridineBR,97%25克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,626-64-2RT,避光
2-苯乙醇/β-苯乙醇/苯甲原醇/2-苯基乙醇/苯乙醇/α-甲基苯基甲醇/α-甲基芐醇/β-苯基乙醇/芐基甲醇/2-PhenylethanolCP,98%500毫升,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,CAS:60-12-8RT
2-苯丙醇/β-苯丙醇/β-羥基異丙苯/β-甲基苯基乙醇/β-羥基乙苯丙醇/2-Phenyl-1-propanolBR,98%100毫升EMK原裝98103-87-8RT
3-苯丙醇/γ-苯丙醇/氫化肉桂醇/γ-羥基丙基苯/3-苯基丙醇/利膽醇/3-苯基-1-丙醇/3-phenylpropanolBR,99%100毫升,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,122-97-4RT
9-芴甲醇/芴甲醇/9-芴基甲醇/9-(羥基甲基)芴/9-FluorenylmethanolBR,99%5克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,24324-17-2RT
二苯基甲醇/二苯甲醇/α-苯基苯甲醇/雙苯甲醇/DiphenylcarbinolAR,99%100克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,91-01-0RT
三氯叔丁醇/氯丁醇/三氯丁原醇/安鈉新/克羅勒吞/1,1,1-三氯-2-甲基-2-丙醇/β,β,β-三氯叔丁醇/1,1,1-三氯叔丁醇/氯代丁醇/ChlorobutanolCP,98%500克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,57-15-8RT
肉桂醇/桂皮醇/苯丙烯醇/桂醇/3-苯基-2-丙烯-1-醇/β-苯丙烯醇/Cinnamyl alcoholBR,98%250克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,104-54-1RT,避光
2-壬醇/庚基甲基甲醇/甲基庚基甲醇/2-壬基醇/2-NonanollBR,99%25克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,628-99-9RT
十八醇/硬脂醇/脂蠟醇/1-羥基十八烷/1-十八醇/十八碳醇/十八脂肪醇/十八烷醇/1-十八烷醇/正十八醇/正十八烷醇/1-OctadecanolCP500克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,112-92-5RT
牛眼莫拉氏菌PCR檢測(cè)試劑盒在哪里有賣5-Hydroxy-1-tetralone 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
Wright's stain 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
1,2,6-Hexanetriol 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
beta-Cyclodextrin methyl ethers 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
Diethyl fluoromalonate 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
5-AMINO-3-METHYLISOXAZOLE 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
N-(tert-Butoxycarbonyl)-L-alanine 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
Benzotriazol-1-yloxytris(dimethylamino)-phosphonium hexafluorophosphate 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
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