猛烈欧美式x0x0又黄动态图_欧洲熟妇色xxxxx欧美老妇hd_捆绑紧缚调教sm视频在线观看_337p粉嫩日本欧洲亚福利_亚洲综合五月

PRODUCTS
產(chǎn)品中心
  • ELISA試劑盒
  • 細胞
  • 質(zhì)粒
  • 標準品
  • PCR基因檢測試劑盒
  • 生化試劑
  • 生化檢測試劑盒
  • 抗體
  • 細胞系
  • 原代細胞
  • 細胞培養(yǎng)基
  • 細胞分析
  • 中藥標準品
  • 技術(shù)文章/ARTICLES

    首頁   >    技術(shù)文章   >   標本因素對ELISA測定的影響

    標本因素對ELISA測定的影響

    點擊次數(shù):937  更新時間:2016-02-26

     ELISA即酶聯(lián)免疫吸附試驗,是一種常用的固相酶免疫測定方法。ELISA的基本原理是:

    ①使抗原(或抗體)結(jié)合到某種固相載體表面,并保持其免疫活性;

    ②使抗原(或抗體)與某種酶聯(lián)結(jié)成酶標抗原(或抗體),而且此酶標抗原(或抗體)既保留其免疫活性,又保留其酶活性;

    ③測定時將受檢標本(抗體或抗原)和酶標抗原(或抗體)按不同步驟與固相載體表面的抗原或抗體進行反應(yīng),再用洗滌方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其它物質(zhì)分開,zui后結(jié)合在固相載體上的酶量與標本中受檢的抗體或抗原量成一定比例;再加入酶反應(yīng)底物后,底物被酶催化后變?yōu)橛猩a(chǎn)物,根據(jù)其顏色反應(yīng)的深淺進行定性或定量分析,以了解被測標本中抗體或抗原含量。

        elisa方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。但ELISA測定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術(shù)要求,在臨床檢驗中除正常反應(yīng)外,有時常可見到一些錯誤結(jié)果(即假陽性或假陰性結(jié)果)。引起ELISA測定錯誤結(jié)果的原因主要有:

    ①標本因素;

    ②試劑因素;

    ③操作因素。

    現(xiàn)就標本因素對ELISA測定的影響做如下討論。

        血清是zui常用的ELISA標本,血漿一般可視為與血清同等的標本,標本引起的假陽性和假陰性結(jié)果主要是干擾性物質(zhì)所致,分為內(nèi)源性物質(zhì)和外源性物質(zhì)兩種:

    1、內(nèi)源性物質(zhì) 有人認為大約40%的人血清標本中含有非特異性干擾物質(zhì),可以不同程度影響檢測結(jié)果。常見的干擾物質(zhì)有:類風濕因子、補體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig (s)抗體、交叉反應(yīng)物質(zhì)和其它物質(zhì)等。

    (1)類風濕因子

        人血清中IgM、IgG型類風濕因子(RF)可以與ELISA系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶標記二抗的FC段直接結(jié)合,從而導(dǎo)致假陽性。

    解決該情況的辦法是:

    ①用F(ab)2替代完整的IgG;

    ②標本用聯(lián)有熱變性(63℃,10 min)IgG的固相吸附劑處理(將熱變性IgG加入到標本稀釋液中同樣有效);

    ③檢測抗原時,可以用2-巰基乙醇等加入到標本稀釋液中,使RF降解。

    (2)補體 ELISA系統(tǒng)中固相一抗和標記二抗過程中,抗體分子發(fā)生變構(gòu),其FC段的補體C1q分子結(jié)合位點被暴露出來,使C1q 可以將二者連接起來,從而造成假陽性。解決的辦法是:①用EDTA稀釋標本;②用53℃,10 min或56℃,30 min加熱血清使C1q滅活。

    (3)嗜異性抗體 人類血清中含有能與嚙齒類動物(如鼠等)Ig (s) 結(jié)合的天然嗜異性抗體,可將ELISA系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來,也能造成假陽性。解決的辦法是:可在標本稀釋液中加入過量的動物Ig (s) ,但加入量不足或亞類不同時無效。

    (4)嗜靶抗原的自身抗體 抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體,有時能與靶抗原結(jié)合形成復(fù)合物,在ELISA方法中均可干擾抗原抗體測定結(jié)果。為避免以上情況出現(xiàn),解決的辦法是:測定前需用理化方法將其解離后再測定。

    (5)醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig (s) 抗體 臨床開展的用鼠源性CD3等單克隆抗體治療,用放射性同位素標記鼠源性抗體的影像診斷及靶向治療等新技術(shù),均有可能使這些病人體內(nèi)產(chǎn)生抗鼠抗體;另外,被鼠等嚙齒類動物咬傷的病人體內(nèi)也可以產(chǎn)生抗鼠Ig (s) 抗體。這些病人ELISA測定時均可產(chǎn)生假陽性。解決的辦法是:測定抗原時,在標本中加入足量的正常鼠Ig (s) ,從而克服由于上述原因造成的假陽性。

    (6)交叉反應(yīng)物質(zhì) 類地高辛、類AFP樣物質(zhì)等,是與靶抗原有交叉反應(yīng)的物質(zhì)。在用多抗測定抗原時對測定結(jié)果影響不大,但在用單克隆抗體測定抗原時,如果交叉抗原決定簇正好是所用單克隆抗體相對應(yīng)的靶決定簇時,也會出現(xiàn)假陽性結(jié)果。

    (7)標本中其它成分的影響 血清脂質(zhì)過高、膽紅素、血紅蛋白及血液粘度過大等,均對ELISA測定結(jié)果有干擾作用。

    關(guān)注我們:

    © 2024 上海一研生物科技有限公司版權(quán)所有  備案圖標.png滬ICP備14030958號-14    管理登陸    技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng)    GoogleSitemap