1.烤片: 將待做切片置于切片架上,于60℃恒溫烤箱中至少烤1 hr;石蠟包埋組織切片3~4μm 厚度
2.脫蠟: 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟3 次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次10 min;
3.水化: 切片經(jīng)下行酒精水化,無水乙醇5min,95%乙醇2 次(每次2min),85%乙醇2 min;75%乙醇2min,自來水沖洗,ddH2O 洗2×2min;
4.抗原修復(fù): 根據(jù)抗體說明書推薦方法進行抗原修復(fù),常采用高壓、微波(溫度達到98~100℃)或酶消化修復(fù)法,室溫自然冷卻,自來水沖洗,ddH2O 洗2×2min,TBS 洗滌(2×2min)(具體修復(fù)方法見附1)* 注:有些抗原勿需修復(fù),
直接進入第5 步封閉。
5.封閉: 滴加試劑B,37℃濕盒孵育30 min;
6.加一抗:滴加用試劑C(即用型一抗),37℃濕盒孵育2 hr 或4℃過夜;
7.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
8.封閉: 滴加試劑B,37℃濕盒孵育10 min;
9.加二抗: 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗(試劑D),37℃濕盒中孵育30 min;
10.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
11.封閉: 滴加試劑Tween 20,37℃濕盒孵育封閉20 min;
12.加HRP-SA: 滴加用抗體稀釋液稀釋的試劑E(1:50~200,終濃度5~20 nM),37℃濕盒中孵育30 min;
13.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min),TBS 洗滌(2×5 min);
14.顯色:應(yīng)用DAB 溶液(試劑F)顯色;
15.復(fù)染:自來水充分沖洗,復(fù)染,脫水,透明;
16.封片: 待組織標(biāo)本干后,用試劑緩沖甘油封固劑封片;
17.觀察成像: 顯微鏡下觀察成像。
磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α1抗體
雙調(diào)蛋白(結(jié)腸直腸細胞源性生長因子)抗體
磷酸化水通道蛋白2抗體
粘附相關(guān)激酶抗體
磷酸化粘附相關(guān)激酶抗體
磷酸化蛋白激酶B抗體
磷酸化水通道蛋白2抗體
磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體
磷酸化蛋白激酶B抗體
磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體
磷酸化活化轉(zhuǎn)錄因子4抗體
磷酸化雄激素受體抗體
磷酸化雄激素受體抗體
磷酸化蛋白激酶AKT1,2,3抗體
磷酸化蛋白激酶B抗體
磷酸化活化復(fù)制因子2抗體
凋亡相關(guān)蛋白3抗體
自噬相關(guān)蛋白18抗體
自噬相關(guān)蛋白4A抗體
載脂蛋白A4抗體
12脂氧合酶抗體
血管緊張素III抗體
腺苷酸環(huán)化酶3抗體
血管動蛋白抗體
腺病毒早期E1A蛋白抗體
磷酸化活化復(fù)制因子2抗體
磷酸化活化復(fù)制因子2抗體
磷酸化失調(diào)癥蛋白1抗體
錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白17抗體
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