費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌保藏方法
（一）斜面冰箱保藏法
這是蘑菇菌種的一種短期保存法，因為它簡單易行，不需特殊設(shè)備，并能隨時觀察保藏菌種的情況，因此也是常用的菌種保藏方法。
１、保藏方法 蘑菇菌種斜面冰箱保種一般使用PDA斜面培養(yǎng)基即可。菌種移接后，放在22-24℃溫度下培養(yǎng),要勤檢查,當(dāng)菌絲健壯地長滿試管時,及時挑選無污染的培養(yǎng)斜面,棉塞用硫酸紙包扎后放置在4℃的冰箱中保藏。一般2-3個月轉(zhuǎn)管一次。
２、注意事項：由于斜面冰箱保藏是在4℃下進(jìn)行,微生物單孢分離物活動并未停止,需要經(jīng)常轉(zhuǎn)管移接,因此對于保藏所用的斜面菌種質(zhì)量要求較高，其菌絲形態(tài)、菌落特征應(yīng)保持原有特性，操作人員必須對斜面菌種質(zhì)量應(yīng)具有有一定的鑒別能力，所挑選的菌種才能適合保藏，其次菌種的菌齡不能太幼也不能太老，否則冰箱保藏后轉(zhuǎn)管擴(kuò)接易造成退化。再則冰箱溫度應(yīng)控制在2-4℃之間,盡量恒溫使菌絲體處于穩(wěn)定的生理狀態(tài)。
（二）糞草管冰箱保藏法
１、保藏方法：糞草管的培養(yǎng)基是由腐熟麥稈粉100,腐熟牛糞粉25,麩皮8, 石膏粉1%,碳酸鈣2%,含水量65%左右,pH7.5制備而成,調(diào)配后裝入試管中,經(jīng)高壓滅菌后,接入菌種塊,放在22-24℃溫度下培養(yǎng)。要勤檢查是否有污染，當(dāng)菌絲健壯地長滿草基試管時，及時挑選生長正常無污染的試管，棉塞頭用硫酸紙包扎后放置在2-4 ℃的冰箱中,該保藏方法為中期保藏，一般2-3年轉(zhuǎn)管一次。
２、注意事項：由于糞草管可保藏2-3年時間,因此如何防止糞草管的水分損失是該保藏方法時間長短的關(guān)鍵所在,一方面培養(yǎng)基含水量不能低于62%, 另一方面棉塞用硫酸紙包扎后可加些蠟進(jìn)行封口,防止水分蒸發(fā)。 再則有條件應(yīng)把試管保藏在具有保濕的冰柜或冰庫中，溫度控制在2-4℃,濕度控制在90%左右。
（三）液體石蠟保藏方法
液體石蠟防止培養(yǎng)基水分蒸發(fā)，隔絕斜面費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌與 空氣接觸，抑制菌絲的單孢分離物，可能使其處于休眠狀態(tài)，推遲細(xì)胞衰老，延長菌絲的保藏，一般可保藏5-7年，是一種中長期的菌種保藏方法。
１、保藏方法：液蠟保藏蘑菇菌種的培養(yǎng)基為PDA斜面即可。將菌種塊移接到PDA斜面上,在22-24℃下培養(yǎng)15-20天,然后用液體石蠟封藏保存。液體石蠟要選化學(xué)純的，在121℃下高壓滅菌30分鐘,再將液體石蠟在160℃烘箱中加熱1-2小時。亦可將高壓滅菌后的液體石蠟放置在40-60℃溫箱中,使滅菌后的液體石蠟層出現(xiàn)乳白色直至變成*透明的無色為止,目的是將高壓滅菌時侵入液體石蠟中的水蒸發(fā)干凈。 將滅菌除水的液體石蠟用無菌吸管罐到長滿菌絲的斜面試管中，液體石蠟要高出斜面1.0厘米左右，然后用無毒泡沫試管塞塞好，置室溫中保藏。
２、注意事項：菌絲的培養(yǎng)時間不能太短，為防止菌絲體的進(jìn)一步發(fā)育，可適當(dāng)延長菌齡或讓試管先置在冰箱中(2-4℃)2天后再加入液體石蠟。倒入的液體石蠟要超過斜面1.0厘米左右,如過低液體石蠟揮發(fā)后會露出斜面, 從而導(dǎo)致斜面培養(yǎng)基的干涸,縮短了保藏時間。烘烤液體石蠟應(yīng)乇底，盡可能把水分蒸發(fā)干凈， 防止水蒸汽蒸發(fā)導(dǎo)致棉花塞潮濕長霉而影響費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌的保藏。